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本制品是一种常用的细胞转染溶液，主要由HEPES、氯化钠、磷酸盐等组成，其最适pH值为7.05～7.12，经过滤除菌处理。影响磷酸钙转染效率的因素主要有沉淀中DNA含量、DNA在细胞上停留的时间、休克时间。HEPES缓冲盐溶液要求DNA浓度在10～50μg为宜，Hela、BALB等细胞沉淀放置16h，CHO、DUKX、BⅡ等细胞可以通过甘油、DMSO进行热休克处理以提高转染效率。

外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。2×HEPES缓冲盐溶液主要用于磷酸钙转染，其主要成分为HEPES，HEPES是一种非离子两性缓冲剂，能有效控制pH在6.8～8.2范围，尤其在pH7.2～7.4具有较好的缓冲能力，终浓度一般为10～50mmol/L，培养液内含20mmol/LHEPES即可达到较好的缓冲能力。

• 胰蛋白酶消化液
  
• PBS
  
• 无菌水
  
• CaCl₂溶液
  
• 甘油或DMSO
  
• 筛选药物

• 注意无菌操作，尽量避免污染。
  
• 对于瞬时转染，可以不用乙醇沉淀的DNA。
  
• 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高，但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。
  
• 转染12～24h后，可以加入终浓度为10mmol/L的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。
  
• 该试剂用于转染时应检测其转染效率，好的转染效率应介于30～60%之间。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 在转染前24h用蛋白酶消化培养细胞，取适量数期细胞转移至新的培养器皿中，使细胞在转染时生长状态良好。
  
• 在加入DNA之前2～4h，按9mL/10cm培养皿的比例加入完全培养液，置于37℃ 5% CO₂培养箱培养。
  
• 取适量乙醇沉淀的DNA溶解于450μL无菌水中，加入50μL 2.5M CaCl₂，并充分混匀，使Ca²⁺终浓度达到0.25M。
  
• 用移液器一边吹打2×HeBS，一边逐滴加入配制好的DNA/CaCl₂溶液(操作应迅速，一般在30～60s)，并剧烈振荡5s，室温下静置20～30min以形成沉淀。
  
• 取沉淀均匀加入到培养皿细胞中，轻轻晃动使沉淀于培养液充分混匀，置于37℃ 5% CO₂培养箱培养4～16h。如果培养细胞为CHO、DUKX等，可以DMSO或甘油进行休克处理，转染效率会大大增加。即培养4～6h后，用2mL含10%甘油或20% DMSO的完全培养液替换当前培养液，室温下静置3min，加5mL PBS摇动混匀。
  
• 去除培养液，用PBS清洗细胞2次，加入5～10mL完全培养液继续培养。
  
• 对于瞬时转染，在转染的不同时间点内收集细胞并检测，一般时间多控制在12～60h以内。
  
• 对于稳定转染，转染后在非选择性培养液培养18～48h，一般时间多控制在24～36h，以便外源基因表达。
  
• 用胰蛋白酶消化细胞并传代，更换适当的选择培养液继续培养，没2～4d更换一次选择培养液，一般10～14d会出现目的细胞克隆。